菌株鑒定

用于測試的菌株，需經基因型和生物學性狀鑒定，符合要求才能投入使用。

鑒定前先進行增菌培養。為鑒定結果可靠，需同時培養野生型TV菌株，作為測試菌基因型之對照。增菌培養用牛肉膏蛋白胨液體培養基，接種后于37℃，100r/min振蕩培養12h左右，細菌生長相為對數期末，含菌數應為1×109個/ml～2×109個/ml。

鑒定項目：

（1）脂多糖屏障丟失（rfa）用接種環或一端撓起的接種針以無菌操作術取各菌株的增菌培養液，在營養瓊脂平板上分別劃平行線，然后用滅菌尖頭鑷夾取滅菌濾紙條，浸濕結晶紫溶液，貼放在平板上與各接種平行線垂直相交。蓋好皿蓋后倒置于37t溫箱，培養24h后觀察結果。

（2）R因子劃線接種，貼放濾紙條及培養等均同上，唯濾紙條浸濕的藥液不同，為氨芐青霉素鈉溶液。TA102除pKM101外，還有pAQ1，載有抗四環素的基因，故另用濾紙條浸濕四環素溶液后貼放于劃線接種的平板上。

（3）紫外線損傷修復缺陷（△uvrB）在營養瓊脂平板上按上述方法劃線接種后，一半接種線用黑玻璃遮蓋，另一半暴露于紫外光下8sec，然后蓋好皿蓋并用黑紙包裹平皿，防止可見光修復作用。培養同上。

（4）自發回變預先制備底平板；向滅菌并在水浴內保溫45℃的上層軟瓊脂中注入0.1ml菌液；混勻后傾于底平板上并鋪平。平皿倒置于37℃溫箱培養48h。

（5）回變特性——診斷性試驗上層軟瓊脂中除菌液外，還注入已知陽性物之溶液，需活化系統者并加入S9mix，余同上。